細胞轉染的幾種方法

　　細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。
 

　　細胞轉染的幾種方法：
 

　　1.脂質體轉染法
 

　　陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將包裹入內，形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞進入細胞。適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前實驗室方便的轉染方法之一，其轉染率較高，優于磷酸鈣法。由于脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。常用細胞類型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
 

　　2.電穿孔轉染法
 

　　電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內，這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或幾乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70% 的細胞?，F在針對細胞死亡開發出了一種電轉保護劑，可以大大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉染效率。
 

　　3.病毒感染
 

　　對于脂質體轉染與電穿孔轉染都無法成功轉染的細胞系建議用病毒感染，此法可以快速感染，檢測成功率高。