原代細胞取材的注意事項有哪些？

取材作為原代細胞培養(yǎng)過程中至關(guān)重要的一步，那么原代細胞取材的注意事項有哪些呢？讓我們一起來看看吧！

一、皮膚和粘膜

主要取皮片，面積一般2~4平方厘米。

二、內(nèi)臟和實體瘤

1.無菌環(huán)境；

2.熟悉所需組織的類型和部位；

3.要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結(jié)締組織。

三、血液細胞

一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細胞，取材時應(yīng)注意抗凝。

四、骨髓、羊水、胸/腹水細胞

嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養(yǎng)，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng)，不宜低溫存放。

五、動物組織取材——鼠胚組織

1.用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物；

2.將其浸泡在含有75%酒精的燒杯中，5分鐘后取出動物；

3.在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢，切開皮膚；

4.用無菌操作法解剖取胚。

六、動物組織取材——幼鼠胚腎(或肺)

幼鼠采用上述方法處死消毒后→腹部朝上固定在木板上，先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè)→采用無菌法打開胸腔取肺，或從背部打開腹腔取腎。

七、雞(鴨)鳥類胚胎組織

1.取孵化至適當(dāng)胚齡(9~12天)的胚蛋，用照蛋燈在暗處燈檢，若有豐富血管、胚體有運動的胚蛋，說明胚體發(fā)育良好，并用有色筆劃出氣室和胚體位置；

2.將胚蛋置于蛋架上，先用溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干;

經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后，在無菌條件下采用無菌法用剪刀或鑷子打開氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼;

3.用眼科鑷撕去殼膜，暴露出雞胚;

4.用彎頭鑷輕挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。

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