Elabscience Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的操作方法有哪些？

Elabscience Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用于檢測(cè)懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的凋亡試劑盒。那么你知道Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的操作方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

一步法

1．細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300 ×g 離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

2．取 1~5 × 10⁵ 重懸的細(xì)胞，300 ×g 離心 5 min，棄上清。用 PBS 洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入500 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer重懸細(xì)胞。

3．細(xì)胞懸液中加入5μL的Annexin V-FITC Reagent和5μL的 PI Reagent (50μg/mL)。

4．輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15~20 min。

5．立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

注：流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-FITC可用FITC通道，PI 優(yōu)先選擇PerCP/Cy5.5 通道，其次是ECD通道。

兩步法

1. 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300 ×g離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS 洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

2. 取1~5 × 10⁵重懸的細(xì)胞，300 ×g離心 5 min，棄上清。用 PBS 洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入100 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer 重懸細(xì)胞。

3. 細(xì)胞懸液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和2.5 μL的PI Reagent (50μg/mL)。（由于兩步法 分辨率更高，染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果；用戶亦可根據(jù)自己的模型進(jìn)行滴定后 加入適量的染色液，用更少的量獲得高質(zhì)量的結(jié)果。）

4. 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育 15~20 min。

5. 加入 400 μL 稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer，混勻樣本。

6. 立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。 注：流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI優(yōu)先選擇 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。

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