RNA提取試劑盒用于從細(xì)胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA，用LB10裂解樣品后，加入氯仿，溶液分為無(wú)色水相和粉紅色有機(jī)相，RNA在水相中；用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA），流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比，該試劑盒裂解能力強(qiáng)、提取量高、專一性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣。
RNA提取試劑盒使用方法：將0.5mL結(jié)合液加入到一管裝有1mgOligo(dT)纖維素的離心管中，放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA100μL加熱到65℃5分鐘后加入等體積的結(jié)合液，轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中，顛倒混勻數(shù)次，離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)離心管中。用0.5mL結(jié)合液，混勻后4℃200g離心5分鐘，小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次，用RNase-free水洗脫mRNA，用微量核酸沉淀劑沉淀回收mRNA。
RNA提取試劑盒實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備：
1、預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
①使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。
②玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí)，塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。
③配制溶液應(yīng)使用無(wú)RNase的水。
④操作人員戴一次性口罩和手套，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要勤換手套。
2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。
3、使用前若發(fā)現(xiàn)TRIzonReagent有沉淀，可置于56℃水浴幾分鐘，即可溶解。
4、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽說(shuō)明在BufferRW2中加入無(wú)水乙醇。
5、所有離心步驟若無(wú)特殊說(shuō)明均在室溫下進(jìn)行，且所有操作步驟動(dòng)作要迅速。
6、若下游實(shí)驗(yàn)對(duì)DNA非常敏感，建議用不含RNase的DNaseI(貨號(hào)：WE0213S)對(duì)RNA進(jìn)行處理。
更新時(shí)間：2022-05-28
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